回輸干細(xì)胞必看：應(yīng)用中患者最關(guān)心問題

當(dāng)臨床應(yīng)用干細(xì)胞治療時(shí)，選擇哪個(gè)代次的干細(xì)胞治療更加合適，是經(jīng)常被問到的問題。人分男女老少，而干細(xì)胞也有年輕和衰老之分，細(xì)胞代數(shù)也是影響臨床治療效果的重要因素。 圖片 干細(xì)胞多久見效？持續(xù)時(shí)間多久？ “首先，每個(gè)人的應(yīng)用情況是不同的，有些是亞健康（癥狀不一樣）、有些是疾病（病種不一樣），其中又涉及到性別、年齡、地域、遺傳、單病種和多病種、疾病進(jìn)展?fàn)顩r等等的因素，造成個(gè)體之間的差異千差萬別。 其次，輸注方式是不同的，動(dòng)脈、靜脈、局部注射以及是否聯(lián)合其它療法等；再次，生活方式和作息習(xí)慣也會(huì)對(duì)進(jìn)入體內(nèi)細(xì)胞的生存率和活性產(chǎn)生影響；最后，使用的細(xì)胞類型、細(xì)胞數(shù)量、間隔周期等因素也會(huì)導(dǎo)致最終結(jié)果不同。 總而言之，每一個(gè)我們可能想到的點(diǎn)，最終都會(huì)影響到細(xì)胞所能起到的效果以及持續(xù)性的問題。” 目前比較普遍的規(guī)律是，幾分鐘到3天會(huì)有比較明顯的注射反應(yīng)，之后的兩周內(nèi)會(huì)細(xì)胞發(fā)生遷移產(chǎn)生生物反應(yīng)，未來6-12周會(huì)逐漸產(chǎn)生療效反應(yīng)，持續(xù)時(shí)間一年到幾年不等。 注射反應(yīng)： 有三個(gè)層面的意思，一是只要有外源性物質(zhì)的輸入都會(huì)引起我們相應(yīng)的反應(yīng)，二是極低概率的敏感體質(zhì)的人對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生的反應(yīng)，三是細(xì)胞本身產(chǎn)生的分泌物作用于人體產(chǎn)生的反應(yīng)。 生物反應(yīng)： 是指細(xì)胞在在各個(gè)器官遷移，在不同的微環(huán)境中釋放出不同細(xì)胞因子或者分化為相應(yīng)類型的功能細(xì)胞，相應(yīng)的產(chǎn)生的微環(huán)境的變化給身體帶來的感覺。 療效反應(yīng)： 是指細(xì)胞已經(jīng)適應(yīng)體內(nèi)環(huán)境并在功能層面開始運(yùn)作，對(duì)我們的身體進(jìn)行修復(fù)或者抑制某些不好的反應(yīng)，我們?cè)谥饔^感受和生理指標(biāo)上能夠?qū)崒?shí)在在得到的反饋。 效果持續(xù)多久這個(gè)問題涉及到的東西就更復(fù)雜了，同樣的一批魚苗放到不同的池塘里面，中間的飼養(yǎng)方式不一樣，半年后捕獲，魚的重量、體型、顏色都會(huì)不一樣，類似的道理同樣適用于細(xì)胞，每個(gè)人的體內(nèi)環(huán)境不一樣，每個(gè)人的生活作息規(guī)律不一樣，造成的結(jié)果也完全不一樣。 現(xiàn)實(shí)中不乏這樣的例子，應(yīng)用細(xì)胞就是為了天天喝酒，天天熬夜，天天放縱，這樣是不可取的，就如同傷口還沒有結(jié)痂脫落，我們動(dòng)不動(dòng)就去抓傷口，造成經(jīng)久不愈，細(xì)胞絕對(duì)不是神丹妙藥，更不是急救藥，也因此鄭重的勸誡所有人用了細(xì)胞還需要好好遵醫(yī)囑，作息規(guī)律，起碼也要等本錢足夠了再去揮霍，否則只能等著吃后悔藥。 再說一下效果持久和多久需要再補(bǔ)充的問題。 我們的健康值就如同電池的電量一樣，從100到0，現(xiàn)在可能大多數(shù)的人處于75甚至是50。我們的電量即使只是在待機(jī)也在慢慢消耗，通過補(bǔ)充細(xì)胞或者其它方法都可以提高健康度即使達(dá)到100，也不會(huì)像之前那樣經(jīng)用，因?yàn)殡姵乩匣萘勘旧硪呀?jīng)出了問題。 同樣75電量的手機(jī)，同樣在充電，一個(gè)什么也不玩，一個(gè)只是在聊微信，一個(gè)在玩游戲，想充到100的電量，需要的時(shí)間是不一樣的。 同樣50電量的手機(jī)，有些人覺得到30才需要充電，有些人覺得維持50也挺好，有些人覺得充到80才能放心。 所以，何時(shí)見效？效果多久？何時(shí)補(bǔ)充？取決于個(gè)體差異的健康狀況，取決個(gè)體差異的生活習(xí)慣，取決于個(gè)體差異的健康理念。 干細(xì)胞應(yīng)用到底選擇第幾代？ 當(dāng)臨床應(yīng)用干細(xì)胞治療時(shí)，選擇哪個(gè)代次的干細(xì)胞治療更加合適，是經(jīng)常被問到的問題。人分男女老少，而干細(xì)胞也有年輕和衰老之分，細(xì)胞代數(shù)也是影響臨床治療效果的重要因素。 我們先來看看細(xì)胞代次的概念：目前最主要的表述有兩種，一種是細(xì)胞世代，一種是傳代代數(shù)，具體見下表。 圖片 備注：P0為剛從組織分離出來的原代細(xì)胞，一般干細(xì)胞傳代擴(kuò)增倍數(shù)為3-5倍，圖表中以3倍為例。 現(xiàn)在我們常說的細(xì)胞代次是傳代代次，如果換算成細(xì)胞世代的話可以有一個(gè)粗略的對(duì)比，傳代代次的3代細(xì)胞相當(dāng)于細(xì)胞世代的5代，傳代代次的4代細(xì)胞相當(dāng)于細(xì)胞世代的6-7代，傳代代次的5代細(xì)胞相當(dāng)于細(xì)胞世代的8代。依次類推，中間不考慮損耗和各實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)工藝和培養(yǎng)體系的差異，如果干細(xì)胞傳代擴(kuò)增倍數(shù)用5倍來計(jì)算的話，傳代代次和細(xì)胞世代之間的差距是更大的。 理論上講，細(xì)胞代數(shù)越靠前，干細(xì)胞的干性也越強(qiáng)。但是干細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過程中，干細(xì)胞有從組織微環(huán)境到體外培養(yǎng)環(huán)境的一個(gè)調(diào)整和適應(yīng)過程，一部分不適應(yīng)的細(xì)胞會(huì)被淘汰，所以在前兩三代，干細(xì)胞基因組有著不穩(wěn)定的因素，可能不宜臨床應(yīng)用。有研究顯示，通過核型分析發(fā)現(xiàn)，在前三代細(xì)胞中，干細(xì)胞存在異常核型的比例偏高。就如間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,MSCs）而言，臨床應(yīng)用的最佳代數(shù)應(yīng)該在4~6代。 目前臨床研究中，MSC應(yīng)用較為常見的來源骨髓、脂肪、臍帶、胎盤等，本文以臍帶、脂肪、胎盤這三類比較常見的來源進(jìn)行總結(jié)，針對(duì)不同來源間充質(zhì)干細(xì)胞，體外傳代培養(yǎng)后不同代次的一些生物學(xué)特性的變化（例如：細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞周期檢測(cè)、表面標(biāo)記物檢測(cè)、染色體核型分析、相關(guān)基因表達(dá)及細(xì)胞因子的定量分析）。 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞長(zhǎng)期體外傳代培養(yǎng)后其基本的干細(xì)胞生物學(xué)屬性, 如細(xì)胞表面免疫標(biāo)志物和誘導(dǎo)多向分化潛能, 無顯著性改變。長(zhǎng)期培養(yǎng)至20代, 未發(fā)現(xiàn)致病性或致瘤性基因變異。高代次(P20)hUC-MSCs的細(xì)胞增殖活性和端粒酶活性與早期低代次(P5)細(xì)胞無顯著性差異。隨著培養(yǎng)代次的增加, 細(xì)胞開始出現(xiàn)老化, 尤以20代細(xì)胞表現(xiàn)最為明顯。 圖片 不同代次人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察 體外傳代培養(yǎng)至第5、10代hUC-MSCs呈現(xiàn)完全相同的細(xì)胞形態(tài)與生長(zhǎng)排列方式, 均呈現(xiàn)長(zhǎng)梭狀貼壁生長(zhǎng), 輕度螺旋流水狀排列。第20代細(xì)胞呈現(xiàn)非常相似的長(zhǎng)梭狀貼壁生長(zhǎng), 但胞體略顯增大, 融合后局部排列紊亂。 已有研究顯示, 雖然高代次培養(yǎng)的hUC-MSCs染色體組型依然保持穩(wěn)定,但至第7代時(shí)其端粒酶活性會(huì)有所下降。我們通過檢測(cè)人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶活性亞單位基因的表達(dá)顯示, 第5、10和20代hUC-MSCs的端粒酶活性之間并沒有顯著性差異; 且不同代次細(xì)胞呈現(xiàn)相似的生長(zhǎng)增殖曲線, 表明它們的細(xì)胞增殖活力也無差異性。 圖片 雖然第20代hUC-MSCs依然保持與低代細(xì)胞類似的干細(xì)胞生物學(xué)屬性、基因穩(wěn)定性和生長(zhǎng)特征, 隨著傳代培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng), 細(xì)胞開始呈現(xiàn)一定程度的老化現(xiàn)象。鑒于過度的傳代培養(yǎng)會(huì)導(dǎo)致hUC-MSCs出現(xiàn)老化征象, 建議用于干細(xì)胞臨床治療的hUC-MSCs體外培養(yǎng)最好不超過第10代。 雖然第20代hUC-MSCs依然保持與低代細(xì)胞類似的干細(xì)胞生物學(xué)屬性、基因穩(wěn)定性和生長(zhǎng)特征, 隨著傳代培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng), 細(xì)胞開始呈現(xiàn)一定程度的老化現(xiàn)象。鑒于過度的傳代培養(yǎng)會(huì)導(dǎo)致hUC-MSCs出現(xiàn)老化征象, 建議用于干細(xì)胞臨床治療的hUC-MSCs體外培養(yǎng)最好不超過第10代。 有研究分別對(duì)胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞P5、P10和P15代細(xì)胞的增殖能力進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果顯示P5代間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖能力明顯高于P10和P15代，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)，隨著細(xì)胞代次的增加，細(xì)胞會(huì)逐漸出現(xiàn)的老化。由于胎盤干間充質(zhì)細(xì)胞在P5代后增殖能力會(huì)逐漸的下降，所以作為臨床應(yīng)用時(shí)最好選擇P5代以下的為宜。 染色體細(xì)胞核型沒有明顯易位和缺失等變化，相關(guān)基因表達(dá)量略有差異，培養(yǎng)基內(nèi)分泌的細(xì)胞因子保持穩(wěn)定。 研究表明（利用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的）脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在傳代至5代的過程中，生物學(xué)特性及遺傳特性基本穩(wěn)定，沒有明顯變化。初步揭示了脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外傳代至第5代以內(nèi)可以安全使用。 圖片 因此，代次太靠前或者太靠后都不是最好的選擇，同時(shí)也要考慮培養(yǎng)條件的因素才能做出最佳的選擇。 結(jié)論 不論是自體還是異體，在保證同樣的細(xì)胞質(zhì)量的前提下，應(yīng)該由專業(yè)的醫(yī)生決定使用自體還是異體，甚至有些時(shí)候應(yīng)該把主動(dòng)權(quán)交給消費(fèi)者自己選擇，只有在應(yīng)用達(dá)到一定的數(shù)量，有了更多的數(shù)據(jù)積累，我們才能更有資格去說是哪種好，而不是單單從理論層面憑空想象。 干細(xì)胞到了體內(nèi)能存活多久？ 干細(xì)胞能治療多種疾病尤其是一些疑難雜癥，是不爭(zhēng)的事實(shí)，但是療效各有差異，還有一些是沒有療效的案例，我們不得不開始從多個(gè)方面開始研究，到底是什么因素影響了細(xì)胞的療效？ 圖片 傳統(tǒng)的化學(xué)藥物也能治好很多的病，我們先來對(duì)比一下兩者的區(qū)別： 1. 化學(xué)藥物是結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的無生命物質(zhì)，干細(xì)胞是有生命的功能單位； 2. 化學(xué)藥物有明確的半衰期，干細(xì)胞暫時(shí)沒有發(fā)現(xiàn)； 3. 化學(xué)藥物有明確的作用靶點(diǎn)，干細(xì)胞通過多途徑實(shí)現(xiàn)功能； 4. 化學(xué)藥物都是被動(dòng)吸收，干細(xì)胞通過趨化性主動(dòng)遷移； 5. 化學(xué)藥物均一性穩(wěn)定，干細(xì)胞的細(xì)胞周期并不同步。 化學(xué)藥物和干細(xì)胞一樣的地方在于，兩者都沒有在體內(nèi)長(zhǎng)期滯留，而是隨著時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸被機(jī)體清除。 圖片 試驗(yàn)顯示，免疫系統(tǒng)越是健全的個(gè)體，免疫清除能力越強(qiáng)，干細(xì)胞在體內(nèi)存活的時(shí)間就越短，免疫缺陷的機(jī)體，清除干細(xì)胞的能力就越慢。干細(xì)胞在體內(nèi)被清除的速度還和輸注的途徑有一定的關(guān)系，靜脈、動(dòng)脈、局部定向輸注、不同類型的干細(xì)胞等因素都會(huì)影響到干細(xì)胞輸注到體內(nèi)之后的存活時(shí)間。能通過數(shù)據(jù)的匯總得出一些結(jié)論： 1.干細(xì)胞在不同機(jī)體內(nèi)存活的時(shí)間從幾天到幾個(gè)月不等； 2.靜脈、動(dòng)脈和局部注射（腦部、肌肉、心臟、肝臟、腰椎等）存活時(shí)間有差異； 3.自體和異體的干細(xì)胞回輸存活時(shí)間差異不大； 4.靜脈回輸?shù)母杉?xì)胞可以突破血腦屏障，在體內(nèi)的遷移偏好于血管的走向； 5.清髓后干細(xì)胞的存活時(shí)間略有延長(zhǎng)，血管舒張劑對(duì)細(xì)胞的遷移和存活都有促進(jìn)作用； 6.靜脈回輸?shù)母杉?xì)胞剛開始大部分被肺部截留，截留的細(xì)胞仍然可以通過因子的分泌減輕炎癥和修復(fù)組織，隨著時(shí)間推遲肺部滯留的細(xì)胞向其它器官轉(zhuǎn)移； 7.干細(xì)胞的歸巢帶有一定的隨機(jī)性，在不同機(jī)體的分布有差異。 從目前的研究結(jié)果來看，不管是局部注射還是全身性注射，不管是自體干細(xì)胞還是異體干細(xì)胞，機(jī)體均會(huì)逐漸清除干細(xì)胞，清除速度與多因素有關(guān)，包括機(jī)體免疫系統(tǒng)、輸入途徑、細(xì)胞來源的組織、細(xì)胞供體的年齡、細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)間的長(zhǎng)短等。 同時(shí)也因?yàn)楦杉?xì)胞趨化性的特點(diǎn)，健康機(jī)體和損傷機(jī)體的分布也不太一樣，如果機(jī)體有多處損傷的話，干細(xì)胞到達(dá)某一損傷部位的數(shù)量也會(huì)不一樣，尤其是有些隱形的疾病或損傷是我們所不能預(yù)見的，可能我們需要針對(duì)解決的部位成了漏網(wǎng)之魚，因?yàn)楦杉?xì)胞并不能分辨某種損傷的嚴(yán)重程度，無法進(jìn)行先急后緩的修復(fù)策略。 干細(xì)胞歸巢是指自體或外源性的干細(xì)胞在多種因素的影響下，從血管內(nèi)皮細(xì)胞定向性遷移至靶向組織并定植存活的過程。其中向缺血或損傷組織歸巢是間充質(zhì)干細(xì)胞重要特征。當(dāng)機(jī)體組織器官缺血缺氧或者發(fā)生損傷后，通過釋放炎性因子(如白細(xì)胞介素1，腫瘤壞死因子α)和趨化因子(如基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1)等多種成分入血活化間充質(zhì)干細(xì)胞，同時(shí)可以在損傷部位周圍形成配體的濃度梯度，從而趨化間充質(zhì)干細(xì)胞沿濃度梯度向著缺血缺氧的目標(biāo)組織定向遷移。 也因此，單次干細(xì)胞回輸?shù)男Ч幻黠@或者不能持久，需要我們跟化學(xué)藥物有類似的操作，就是按照療程，多久一次，一次多少量，首先起到一個(gè)比較明顯的效果，然后鞏固效果，最終達(dá)到從量變到質(zhì)變的目的。就如同，在我們口渴的時(shí)候，一杯水可以解渴，一口水只能緩解我們口渴的狀態(tài)。

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